Работа 16. Реакция Фоля на аминокислоты, содержащие слабосвязанную серу (цистеин, цистин)

Работа 15. Ксантопротеиновая реакция на циклические аминокислоты

Ксантопротеиновая реакция открывает наличие в белках циклических аминокислот - триптофана, фенилаланина, тирозина, содержащих в своем составе бензольное ядро. Большинство белков при нагревании с концентрированной азотной кислотой дает желтое окрашивание, переходящее в оранжевое при подщелачивании. Реакция обусловлена нитрованием бензольного кольца этих аминокислот с образованием нитросоединений желтого цвета. При подщелачивании возникает хиноидная структура, окрашенная в оранжевый цвет.

Исследуемый материал: раствор яичного белка, 1% раствор желатины.

Реактивы: концентрированная HNO₃, 10% раствор NaOH.

Оборудование: пробирки, капельницы.

ХОД РАБОТЫ. К 5 каплям раствора белка добавляют 3 капли концентрированной HNO₃ и осторожно кипятят. Вначале появляется осадок свернувшегося белка (под влиянием кислоты), который при нагревании окрашивается в желтый цвет. После охлаждения в пробирку наливают по каплям 10% раствор NaOH до появления оранжевого окрашивания вследствие образования натриевой соли динитротирозина.

Реакция Фоля указывает на присутствие в белке аминокислот цистина и цистеина, содержащих слабосвязанную серу. В метионине сера имеет прочное соединение, поэтому эту реакцию не дает. Реакция состоит в том, что при кипячении белка со щелочью цистеин или цистин легко отщепляет серу в виде сернистого натрия, который с плюмбитом дает черный или бурый осадок сернистого свинца. Интенсивность окраски зависит от количества в белке аминокислот цистина и цистеина и от концентрации белка в растворе.

Реакция протекает по следующим уравнениям:

СН₂ – SH CH₂OH

| + H₂O |

CHNH₂ + 2NaOH CHNH₂ + Na₂S + 2H₂O

| |

COOH COOH

Дата добавления: 2015-07-02