Определение количества пектина

Колориметрическое определение количества фруктозы

Метод осно­ван на дегидратации моносахаридов в кислой среде с образованием из кетогексоз оксиметилфурфурола, который с раствором резорцина образует комплексное соединение вишнево-красного цвета. С альдогексозами эта реакция протекает крайне медленно и поэтому глюкоза не ме­шает определению.

Ход определения. Для анализа используют водную вытяжку, приго­товленную для определения редуцирующих сахаров и освобожденную от белков (фильтрат А). Затем разведением доводят содержание фрук­тозы в испытуемом растворе до 0,01 – 0,2 мг/мл. Пипеткой отбирают 5 мл полученного разведенного раствора и переносят в мерную колбу емкостью 25 мл. Добавляют 5 мл 0,1%-ного спиртового раствора резор­цина (раствор 11) и 15 мл 30%-ного раствора НСl (раствор 17), содер­жимое колбы перемешивают и помещают на 20 мин в водяную баню при температуре 80°С для развития окраски. Параллельно готовят холос­той опыт, заменяя испытуемый раствор дистиллированной водой. Ин­тенсивность окраски испытуемых растворов сравнивают на фотоэлектроколориметре с окраской холостого опыта и определяют опти­ческую плотность на светофильтре с длиной волны 540 нм.

Однако при проведении этого анализа происходит гидролиз присут­ствующей в растворе сахарозы и результат определения фруктозы будет завышен. Поэтому во всех случаях в той же навеске растительного мате­риала необходимо сначала определить содержание сахарозы, а затем из полученного с резорциновым реактивом общего количества фруктозы вычесть половинное количество сахарозы, приходящееся на фруктозную часть молекулы.

Для определения содержания фруктозы строят калибровочный гра­фик по стандартному раствору фруктозы. Для этого 10 мг чистой сухой фруктозы растворяют в 100 мл насыщенного водного раствора бензой­ной кислоты (раствор можно длительное время хранить в холодильни­ке). 1 мл такого раствора содержит 1 мг фруктозы. Из этого раствора отбирают 10 мл и разбавляют водой в мерной колбе до 100 мл. Далее полученный раствор используют для построения калибровочного графика.

Контроль за содержанием пектиновых веществ в плодово-ягодном сырье, полуфабрикатах и готовой продук­ции очень важен. От количе­ства и состояния пектиновых веществ зависит выход натуральных соков при производстве плодово-ягодных пастеризованных, спиртованных и сброженно-спиртованных соков. Они также являются одной из основ­ных причин помутнения безалкогольных напитков, вин и ликеро-наливочных изделий.

Выделить пектин из растительных продуктов в природной форме не удается. При гидролизе пектиновых веществ образуется пектиновая кислота и метиловый спирт, соединенные по типу сложных эфиров с карбоксильными и спиртовыми группами галактуроновой кислоты. По­этому все количественные методы определения пектина основаны на установлении количества пектиновой кислоты, образующейся при его гидролизе.

Ход определения. При весовом методе определения общего содер­жания пектина пектиновую кислоту предварительно осаждают соля­ми кальция и в виде пектата кальция высушивают и взвешивают. Навес­ку тщательно измельченной средней пробы отбирают в количестве 100 г с точностью до 0,01 г в фарфоровую чашку, добавляют туда 150 мл дис­тиллированной воды и нагревают смесь на кипящей водяной бане не ме­нее 1 ч. После этого теплую массу без потерь переносят через воронку в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доливают теплой водой до метки. После охлаждения до 15°С колбу доливают холодной дистил­лированной водой до метки, содержимое тщательно перемешивают и фильтруют. Фильтрат (отношение продукта к воде 1: 10) до тех пор повторно возвращают в воронку, пока он не станет чистым. После этого в нем определяют содержание пектина.

При исследовании свежих плодов и ягод, мезги, выжимок, нату­ральных соков берут 10 мл фильтрата, а при анализе уваренных соков и экстрактов – 5 мл. Отобранный пипеткой фильтрат (10 или 5 мл) пере­носят в химический стакан вместимостью 400 мл, прибавляют 100 мл 0,1 н раствора NаOН и оставляют стоять при комнатной температуре на 5– 7 ч. Затем к раствору в стакане добавляют 50 мл 1н раствора уксусной кислоты (раствор 18 а), через 5 мин 50 мл 2н раствора хлористого кальция (раствор 12) и оставляют стоять 1 ч. После чего смесь кипя­тят 5 мин, фильтруют через предварительно высушенный до постоян­ного веса и взвешенный беззольный фильтр, промывают осадок пекта­та кальция кипящей водой до тех пор, пока в промывной жидкости при качественной реакции с азотнокислым серебром перестанет выпадать белый осадок хлористого серебра. Осадок пектата кальция, не содержа­щий хлора, вместе с фильтром помещают в бюкс и сушат в сушильном шкафу при температуре 100°С до постоянного веса.

Содержание пектиновых веществ (X, %) рассчитывают по форму­ле:

X = (G₂ – G₁)× 0,92× V× 100 / (G×V₁),

где G₂ – масса бюкса с высушен­ным фильтром и осадком пектата кальция, г; G₁ – масса бюкса с вы­сушенным фильтром, г; 0,92 – коэффициент пересчета пектата кальция на пектиновую кислоту; V – объем, до которого разбавлена навеска, мл; G – навеска экстракта, г; V₁ – объем раствора, взятый для опре­деления, мл

Вычисление производят с точностью до 0,01%. Конечным результа­том считают среднее арифметическое двух параллельных определений, расхождение между которыми не должно превышать 0,05%.

Дата добавления: 2015-07-13