V Биуретовая реакция на пептидную связь (Пиотровского).

Качественные цветные реакции на функциональные группы белков и аминокислот

Лабораторная работа №1

Биохимия простых белков

Основную роль в структуре и процессах жизнедеятельности живых организмов играют белки, представляющие собой высокомолекулярные азотсодержащие биополимеры со специфическими структурами, состоящие из 20 природных аминокислот, соединенных между собой пептидными связями. Простые белки (протеины) состоят только из аминокислот и являются высокомолекулярными полимерными органическими соединениями – полипептидами.

При взаимодействии белка с отдельными химическими веществами возникают окрашенные продукты реакции. Образование их обусловлено присутствием в молекуле белка той или иной аминокислоты, имеющей в своем составе определенную химическую группировку.

Значение качественных цветных реакций на функциональные группы белков и аминокислот в том, что они дают возможность обнаружить присутствие белка в биологических жидкостях, растворах, лекарственных препаратах и идентифицировать индивидуальные аминокислоты. Эти реакции применяют как для качественного, так и для количественного определения белка и содержащихся в нем аминокислот.

Биуретовая реакция открывает пепетидную связь в белке.

Её способны давать вещества, которые содержат не менее двух пептидных связей. Положительную биуретовую реакцию отдельные аминокислоты не дают, за исключением гистидина (His), серина (Ser), треонина (The) и аспарагина (Asn), с которыми биуретовая реакция получается при условии больших концентраций их в растворе. При добавлении сернокислой меди к сильнощелочному раствору белка или полипептида образуются соединения меди с пепетидной группировкой, окрашенные в красно-фиолетовый или сине-фиолетовый цвет в зависимости от длины полипептидной цепи. Раствор белка даёт сине-фиолетовое окрашивание, а продукты неполного гидролиза (пептоны) – розовое или красное окрашивание.

Принцип метода. В сильно щелочной среде пептидные группы полипептидных цепей переходят в енольную форму, которая, взаимодействуя с ионами Cu²⁺, образует окрашенный (фиолетового цвета) биуретовый комплекс.

При этом енольная форма полипептида, образованная в сильнощелочной среде, дает отрицательный заряд, и ее кислород, взаимодействуя с медью, образует ковалентную связь, а медь, взаимодействуя с атомами азота, образует координационные связи.

Енольная форма пептидной связи ()

Комплекс фиолетового цвета

Дата добавления: 2017-02-01