V Осаждение белков нагреванием.

Реакции осаждения белков

Изучение физико-химических свойств белков необходимо для понимания механизмов развития многих патологических состояний (например, отеков), механизмов транспорта веществ (в том числе лекарственных препаратов). На знании физико-химических свойств белков основано их получение и использование в качестве лекарственных препаратов. Реакции осаждения используются в медицине для качественного и количественного определения белка в биологических жидкостях, для удаления белков из растворов. Пробы коллоидоустойчивости используются для функциональной диагностики болезней внутренних органов.

Реакции осаждения белков в зависимости от применяемого осадителя могут быть обратимыми и необратимыми. В случае необратимых реакций белки не подвергаются глубоким изменениям, и получаемые осадки могут быть вновь растворены в первоначальном растворителе, обычно в воде. Белки при этом сохраняют свои первоначальные нативные свойства. При необратимых реакциях, осажденные белки подвергаются глубоким изменениям, получаемые осадки не могут быть вновь растворены в первоначальном растворителе, обычно в воде, т.е. наступает денатурация белков. Обратимые реакции осаждения можно получить путем так называемого высаливания при помощи нейтральных солей: NaCl, (NH₄)₂SO₄, MgSO₄, спиртом (в случае непродолжительного действия его га белок при низкой температуре) и др.

Значение реакций осаждения белков в том, что они дают возможность: 1) изучить свойства белков; 2) освободить жидкость от присутствия белка, что бывает необходимо при некоторых исследованиях; 3) установить наличие белка, например, в моче, при различных патологических состояниях (заболеваниях почек – нефрите, сердечная декомпенсация и др.); 4) высаливанием с помощью различных концентраций нейтральных солей (или спиртом) можно выделить отдельные белковые фракции.

Почти все белки свертываются при нагревании в нейтральной или слабокислой среде. Более полное и быстрое осаждение белков происходит в изоэлектрической точке. Для большинства белков ИЭТ соответствует слабокислой среде (рН около 5,0). Протамины и гистоны имеют ИЭТ в щелочной среде (рН около 8,0). Кроме рН среды важную роль в свертывании белков при нагревании играет концентрация солей.

Устойчивость белка в растворе к нагреванию зависит от наличия заряда (положительного в сильнокислой среде и отрицательного - в щелочной среде). Полное и быстрое осаждение белков происходит в изоэлектрической точке, которая для большинства белков соответствует слабокислой среде (рН около 5,5).

Принцип метода. При нагревании растворов белка вначале отмечается увеличение опалесценции и появление мути (коагуляции). При дальнейшем повышении температуры - появление хлопьевидного осадка белка (седиментация). При кипячении происходит необратимое изменение природных свойств белка (денатурация).

Дата добавления: 2017-02-01