V Осаждение белков органическими кислотами.

Ход работы

Исследуемый материал и реактивы

V Осаждение белка солями тяжелых металлов.

Ход работы

В 3 пробирки вносят по 1 мл раствора белка и добавляют по 1 мл насыщенных растворов: Na₂S0₄, Mg₂SO₄, (NH₄)₂SO_{4 .} После добавления осадителей к растворам белка, смеси необходимо перемешать встряхиванием. Определяют, в какой пробирке объем осадка больше. Затем проверяют растворимость осажденного белка добавлением 2 мл воды. Выясняют, в какой пробирке происходит растворение осадка. Делают вывод о необратимом или обратимом растворении белков. Результаты оформляют с помощью таблицы (2).

Осаждение белков солями тяжелых металлов, в отличие от высаливания, происходит при небольших концентрациях солей.

Принцип метода. Белки при взаимодействии с солями тяжелых металлов (свинца, меди, серебра, ртути и др.) адсорбируют их, образуя с ними солеобразные и комплексные соединения (на этом основано применение белков в качестве противоядия при отравлении солями тяжелых металлов), растворимые в избытке этих солей (за исключением солей AgNO₃ , HgCl₂), но нерастворимые в воде. Соли тяжелых металлов вызывают необратимое осаждение белков, т.е. денатурацию.

1. Раствор яичного белка (1%). 2. Раствор сернокислой меди,100 г/л. 3. Раствор уксуснокислого свинца, 50 г/л. Раствор уксусной кислоты, 10 г/л. 4. Вода дистиллированная.

В 2 пробирки вносят по 0,5 мл раствора белка и добавляют по 1-2 капли растворов CuS0₄,(CH₃COO)₂Pb. Отмечают выпадение осадка в пробирках. Затем добавляют в каждую пробирку по 1-2 мл воды и определяют растворимость осадка белка. Далее в эти пробирки добавляют по каплям соответствующие растворы осадителей и перемешивают содержимое. Делают вывод о причинах обратимости осаждения белка в растворах солей тяжелых металлов. Результаты опыта оформляют в виде таблицы (2).

В реакциях осаждения белков большое практическое значение получили трихлоруксусная и сульфосалициловая кислоты. Сульфосалициловой кислотой широко пользуются в клинике при обнаружении малых количеств белка в моче и других биологических жидкостях (чувствительность реакции 1:50000). Сульфосалициловая кислота, помимо белков, осаждает продукты их распада – высокомолекулярные пептоны и полипептиды. ТХУ осаждает только белки и не осаждает продуктов их распада. В связи с этим ТХУ осаждают, например, белки крови, когда хотят отделить их от высокомолекулярных пептидов.

Принцип метода. При действии на раствор белка органические кислоты способны нейтрализовать заряд белка и разрушить его пространственную структуру, что приводит к необратимой денатурации и осаждению белка.

Дата добавления: 2017-02-01