Исследуемый материал и реактивы

V Осаждение белков солями щелочных и щелочно-земельных металлов (высаливание).

Ход работы

Исследуемый материал и реактивы

1. Раствор яичного белка (1%). 2. Раствор уксусной кислоты (1%). 3. Насыщенный раствор хлористого натрия. 4. Раствор гидроксида натрия (10%).

В 5 пробирок наливают по 0,5 мл раствора яичного белка.

В первой пробирке нейтральный раствор белка нагревают до кипения. Отмечают появление мути, связанное с разрушением водной оболочки вокруг молекул белка и укрупнению его частиц; мицеллы белка несут заряд и удерживаются во взвешенном состоянии.

Во вторую пробирку прибавляют 3 капли 1% раствора уксусной кислоты, создавая слабокислую среду. Раствор белка нагревают до кипения и частицы белка при этом теряют заряд и приближаются к изоэлектрическому состоянию.

В третью пробирку добавляют 15 капель 1% раствора уксусной кислоты и нагревают раствор до кипения.

В четвертую пробирку наливают 15 капель 1% раствора уксусной кислоты для получения сильнокислой реакции, 2 капли насыщенного раствора хлористого натрия и нагревают. Выпадает хлопьевидный осадок белка, так как частицы белка теряют заряд вследствие взаимодействия белка с разноименно заряженными ионами хлористого натрия.

В пятую пробирку добавляют 6 капель 10% раствора едкого натра, создавая щелочную среду, и нагревают. В каждой пробирке определяют рН среды с помощью индикатора. При кипячении жидкости осадок не образуется, поскольку в щелочной среде отрицательный заряд на частицах белка увеличивается.

Отмечают, в какой пробирке произошло осаждение белка, а в какой - нет.

Делают выводы о влиянии рН среды на белковые макромолекулы и выпадение белка в осадок. Результаты оформляют в виде таблицы (1).

Осаждение белков из растворов при действии высоких концентраций нейтральных солей щелочных и щелочноземельных металлов называют высаливанием. Метод высаливания позволяет получить белки в кристаллическом виде и применяется для разделения и очистки.

Принцип метода. Реакция высаливания (осаждение белков с помощью больших концентраций нейтральных солей) обусловлена дегидротацией макромолекул белка с одновременной нейтрализацией электрического заряда. Для высаливания различных белков требуется неодинаковая концентрация одних и тех же солей. Глобулины, имеющие большую молекулярную массу, легче высаливаются, чем альбумины. Глобулины осаждаются в полунасыщенном, а альбумины – в насыщенном растворе сернокислого аммония.

1. Раствор яичного белка (1%). 2. Насыщенный раствор сульфата натрия. 3. Насыщенный раствор сульфата магния. 4. Насыщенный раствор сульфата аммония. 5. Вода дистиллированная.

Дата добавления: 2017-02-01