V Осаждение белка минеральными кислотами.

Ход работы

Исследуемый материал и реактивы

V Осаждение белков алкалоидными реактивами.

Ход работы

Исследуемый материал и реактивы

1. Раствор яичного белка (1%). 2. Раствор сульфосалициловой кислоты, 200 г/л. 3. Раствор трихлоруксусной кислоты, 100 г/л.

В 3 пробирки вносят по 0,5 мл раствора белка и добавляют по 1-2 капли растворов сульфосалициловой кислоты. Определяют растворимость выпавшего осадка в воде.

Во 2 пробирку наливают 2 мл раствора белка и 2 мл 10% раствора трихлоруксусной кислоты; взбалтывают содержимое и фильтруют через складчатый фильтр, в другую пробирку. Полноту осаждения белков определяют при добавлении к фильтрату сульфосалициловой кислоты. Результаты опытов оформляют в виде таблицы (2).

Алкалоидные реактивы – танин, пикриновая кислота, фосфорно-вольфрамовая, фосфорно-молибденовая кислота раствор йодной ртути в йодистом калии и др. – вызывают необратимое осаждение белка в кислой среде.

Принцип метода. Реакция обусловлена наличием в белке азотистых гетероциклических группировок, аналогично тем, которые встречаются в молекулах алкалоидов (индольные, имидазольныее, пиррольные и др.). При этом алкалоидные реактивы являются анионами, а белки – катионами. Слабое подкисление белкового раствора уксусной кислотой ведет к появлению положительного заряда на поверхности белка и облегчает взаимодействие белка с отрицательно заряженными ионами осадителя. Белки, обладающие основным свойствами (гистоны, протамины), хорошо растворяются в нейтральной среде без подкисления.

1. Раствор яичного белка (1%). 1. Раствор уксусной кислоты (1%). 2. Раствор пикриновой кислоты (10%). 3. Насыщенный раствор танина. 4. Вода дистиллированная.

В 2 пробирки вносят по 0,5 мл раствора белка и добавляют по 5 капель 1% раствора уксусной кислоты. Затем добавляют в одну 5 капель пикриновой кислоты, в другую 5 капель танина. Определяют растворимость выпавшего осадка добавлением 1 мл воды. Результаты оформляют в виде таблицы (2).

Концентрированные минеральные кислоты вызывают денатурацию белка и выпадение его в осадок (образуются комплексные соли белка с минеральными кислотами). Ортофосфорная кислота осадка не дает. В избытке всех минеральных солей, за исключением азотной, выпавший в осадок белок растворяется. В связи с этим реакция осаждения белков азотной кислотой особенно распространена при клинических исследованиях мочи (проба Геллера). Эта качественная реакция с концентрированной азотной кислотой лежит в основе количественного определения белка в моче по методу Робертса-Стольникова-Брандберга.

Принцип метода. Выпадение белка в осадок связано с дегидратацией белковых частиц и их нейтрализацией, что приводит к разрушению пространственной структуры белка и выпадению его в осадок.

Дата добавления: 2017-02-01