Описание работы. Лабораторная работа 2. Определение оптимальной температуры действия фермента амилазы слюны

Приборы и материалы

Лабораторная работа 2. Определение оптимальной температуры действия фермента амилазы слюны

Описание работы

Приборы и материалы

Водяная баня

Электроплитка

Термостат

Раствор амилазы (слюна)

Раствор крахмала 1%

Раствор йода (раствор Люголя)

В качестве источника амилазы используют разбавленный раствор слюны. Разбавленный раствор слюны (aмилазы) получают, ополаскивая рот в течение 1-2 мин 25 мл дистиллированной воды. Жидкость собирают в колбочку и используют для работы. Работу начинают с проверки действия исходного раствора амилазы слюны на крахмал.

Для определения активности амилазы смешивают 1 мл 1 % раствора крахмала и 0,5 мл разбавленной слюны, ставят пробирку на инкубацию в термостат при 37°С. Через каждые 2 мин отбирают по 1 капле этой смеси и смешивают ее с каплей раствора йода (раствор Люголя) на предметном стекле. Когда на стекле желтый цвет раствора йода не изменится, гидролиз крахмала считают законченным. Крахмал должен полностью расщепиться приблизительно за 10 мин. Если расщепление происходит быстрее, слюну необходимо развести еще в 2, 3 или 4 раза.

Свойство ферментов разрушаться при кипячении является характерной особенностью, отличающей ферменты от других катализаторов, и называется термолабильностъю ферментов.

Потеря каталитической активности при кипячении обусловлена денатурацией белковой молекулы фермента. Повышение и понижение температуры сильно изменяют скорость ферментативной реакции.

1 Цель работы – определить оптимальную температуру действия фермента амилазы

Водяная баня

Электроплитка

Термостат

Лед

Раствор амилазы (слюна)

Раствор крахмала 1%

Раствор йода (раствор Люголя)

Берут 2 ряда пробирок по 4 пробирки в каждом ряду и во все пробирки первого ряда (1 - 4) вносят по 1,5 мл 1 % раствора крахмала, а во все пробирки второго ряда (5 - 8) – по 0,5 мл разбавленной слюны. Первую пару пробирок (1 и 5), содержащую субстрат и фермент, помещают в баню со льдом, вторую пару пробирок (2 и 6) оставляют при комнатной температуре, третью пару пробирок (3 и 7) помещают в водяную баню при 37⁰С, а четвертую пару (4 и 8) – в кипящую водяную баню. Через 10 мин содержимое каждой пары пробирок сливают вместе, перемешивают и оставляют пробирки для инкубации в тех же условиях. Добавляет в каждую пробирку 1 каплю раствора Люголя. Результаты записывают в таблицу 1 и делают соответствующие выводы.

Таблица 1- Определение оптимальной температуры действия фермента амилазы слюны

Номер пробирки	Температура (в град. Цельсия)	Окраска йодом (цвет)
1 и 5
2 и 6
3 и 7
4 и 8

Дата добавления: 2015-04-24