Лабораторная работа 8. Определение активности каталазы

Описание работы

Приборы и материалы

Электроплитка

Водяная баня

Термостат

Терка

Ступка

Марля

Дистиллированная вода

Картофель

Раствор тирозина 0,1 %

Для получения ферментного препарата тирозиназы сырой картофельный клубень очищают от кожуры, верхние слои клубня в количестве 2,0-4,0 г кусочками нарезают в ступку, растирают с 10 мл дистиллированной воды и фильтруют через два слоя марли. Допускается для лучшего измельчения потереть картофель на терке. В две пробирки отмеряют по 1 мл полученного фильтрата: содержимое одной пробирки (контрольной) кипятят 1-2 мин и охлаждают водопроводной водой. В обе пробирки добавляют по 1,0 мл 0,1 % раствора тирозина, содержимое пробирок перемешивают и помещают на водяную баню при температуре 30°С. Время от времени пробирки энергично встряхивают для лучшего соприкосновения с воздухом. Постепенно в одной пробирке под действием тирозиназы раствор темнеет за счет образования продуктов окисления тирозина типа меланинов. В контрольной пробирке, где фермент инактивирован нагреванием, цвет жидкости не изменяется.

Фермент каталаза (НФ 1.11.1.6) катализирует процесс разложения перекиси водорода с образованием кислорода и воды. При этом одна молекула перекиси водорода окисляется и служит донором электронов, а другая восстанавливается и является акцептором электронов:

Н₂О₂ + Н₂О_{2 каталаза} О₂ + 2Н₂О

По химической природе каталаза является геминовым ферментом. Небелковая часть фермента содержит четыре гематиновые группы. Железо в гематине – трехвалентное.

Каталазу можно обнаружить почти во всех тканях и большинст­ве аэробных микроорганизмов. Особенно много каталазы находится в эритроцитах.

При количественном определении активности каталазы измеряют количество перекиси водорода, разложенной каталазой. Неразрушенная часть перекиси оттитровывается перманганатом калия в присут­ствии серной кислоты:

2КМn0₄ + 5Н₂О₂ + 3Н₂SО₄ 2MnSО₄ + K₂SО₄ + 8H₂О + 5О₂

О количестве расщепленной перекиси водорода судят по разнос­ти количества перманганата калия, израсходованного на титрование до и после действия каталазы.

1 Цель работы – определить активность каталазы

Дата добавления: 2015-04-24