Лабораторная работа 4. Влияние активаторов и ингибиторов на активность фермента амилазы

Описание работы

Приборы и материалы

Лабораторная работа 3. Влияние значения реакции среды на активность фермента амилазы

Скорость ферментативных реакций в очень большой степени зависит от концентрации водородных ионов в среде. Концентрация Н⁺ ионов, при которой наблюдается максимальная скорость реакции, называется оптимальной. Изменение кислотности среды в ту или другую сторону от оптимума рН вызывает понижение активности фермента.

Влияние значения рН на активность фермента связано в первую очередь с ионизацией функциональных групп фермента, входящих в состав активного центра фермента.

Оптимум рН действия амилазы слюны определяют при взаимодействии ее с крахмалом при различных значениях рН среды. О степени расщепления крахмала судят по окраске продуктов реакции с раствором йода.

При оптимальном значении рН расщепление крахмала произойдет полностью (отсутствие окраски с йодом); по мере удаления от этой точки в кислую или щелочную зону расщепление крахмала произойдет только частично, до стадии декстринов (красно-бурая или фиолетовая окраска), или крахмал вообще не будет расщепляться (синяя окраска с йодом).

1 Цель работы – выявить влияние реакции среды на активность фермента амилазы

Раствор амилазы (слюна)

Раствор крахмала 1%

Раствор йода (раствор Люголя)

Фосфатная буферная смесь (pH от 5,4 до 8,0)

В восемь пронумерованных пробирок приливают по 2 мл фосфатной буферной смеси с различным значением рН от 5,4 до 8,0. Жидкость в каждой пробирке перемешивают и в каждую добавляют по 1 мл 1 % раствора крахмала и по 0,5 мл раствора слюны. Пробирки оставляют стоять на столе на 10 мин. После этого из каждой пробирки 1 каплю смешивают с 1 каплей йода на предметном стекле и сравнивают между собой окраски из каждой пробирки. Когда содержимое пятой пробирки будет давать с йодом красно-бурую окраску, через 1-2 мин во все пробирки добавляют по 2-3 капли раствора йода, начиная с первой, и содержимое хорошо взбалтывают. Сравнивают между собой окраску всех пробирок и по полученной окраске судят о степени расщепления крахмала, а, следовательно, об активности фермента в зависимости от значения рН среды. Результаты опыта и выводы записывают в таблицу 2.

Таблица 2 – Влияние реакции среды на активность фермента амилазы

Значение рН пробы	5,4	5,8	6,2	6,6	6,8	7,0	7,4	8,0
Окраска с йодом

Каталитическое действие ферментов в очень большой степени зависит от присутствия определенных веществ, одни из которых ускоряют, а другие тормозят ферментативную активность. Первая группа веществ получила название активаторов, а вторая - ингибиторов или парализаторов ферментов. Механизм действия бывает очень сложным, но часто сводится к осаждению фермента или связыванию функциональных групп фермента, входящих в его активный центр.

1 Цель работы – оценить влияние активаторов и ингибиторов на активность фермента амилазы

Дата добавления: 2015-04-24