Гемоглобінцианідним методом

Кількісне визначення гемоглобіну в крові

Завдання. Визначити вміст гемоглобіну в крові гемоглобінцианідним методом.

Принцип. Гемоглобін крові при взаємодії з залізосинєродистим калієм (червона кров’яна сіль) окислюється у метгемоглобін.

Х ід роботи. До 5 мл трансформуючого розчину додають 0,02 мл крові (розведеної у 25 разів), добре перемішують. Визначення проводять через 10 хв проти холостої проби (трансформуючого розчину). Визначають оптичну щільність на спектрофотометрі при 540 нм в 1 см кюветі. Вміст гемоглобіну (Х) у г/л розраховують за формулою: Х= D₅₄₀×367,7.

При фотометруванні визначення проводять в діапазоні хвиль 500 – 560 нм (зелений світлофільтр). Еталонний розчин гемоглобіну готують так само, як й пробу цільної крові. Розрахунок вмісту гемоглобіну (У) у г/л проводять за формулою: У= (D_досл.×120)/D_ет., де D_досл. – оптична щільність дослідної проби; D_ет. – оптична щільність еталонної проби; 120 – вміст гемоглобіну в еталонному розчині (г/л).

Клініко-діагностичне значення. У нормі вміст гемоглобіну в крові для чоловіків складає 130-160 г/л, для жінок – 120-140 г/л. Визначення його вмісту – необхідний етап діагностики різних захворювань. Підвищення гемоглобіну в крові може бути пов’язано з наступними станами: 1) захворювання, при яких підвищується рівень еритроцитів; 2) підвищення кисневої ємності крові, викликане гіпоксією при серцево-судинній патології; проживанні у високогірних районах; ожирінні, палінні та утворенні неактивного гемоглобіну; 3) зневоднювання організму; 4) стрес та високі фізичні навантаження; 5) новоутворення у нирках, печінці, ЦНС, яєчниках; порушення функції судин; 6) порушення гормонального рівня (підвищення кортикостероїдів або андрогенів); 7) хімічні отруєння угарним газом, нітратами або ліками; 8) опіки. Зниження гемоглобіну в крові може бути наслідком: 1) кро-вотечій; 2) зниження рівня еритроцитів при різних видах анемій (дефіцит ві-тамінів В₁₂ та В₉; дефіцит вітаміну С; недостатність заліза; інтоксикації або порушення роботи нирок; порушення дозрівання еритроцитів). Зниження гемоглобіну також можуть викликати різноманітні фактори: неповноцінне харчування, порушення роботи шлунково-кишкового тракту, вживання великої кількості чаю, кави та продуктів, що гальмують всмоктування заліза.

ЛІТЕРАТУРА

1. Губський Ю.І. Біологічна хімія / Ю. І. Губський. – Київ-Тернопіль: Укрмедкнига, 2000. – С. 263-269, 419-423.

2. Губський Ю.І. Біологічна хімія: підручник / Ю. І. Губський. – Київ-Вінниця: Нова книга, 2007. – С. 317-323, 502-507.

3. Біохімія людини: підручник / Я.І. Гонський, Т.П Максимчук., М.І Калинський. – Тернопіль: Укрмедкнига, 2002. – С. 553-562.

4. Березов Т.Т. Биологическая химия / Т.Т Березов, Б.Ф.Коровкин. – М.: Медицина, 1998. - С. 78-85, 503-506.

5. Биохимия: учебник / под ред. Е.С. Северина. – М.: ГЭОТАР-МЕД, 2003. – С. 636-645.

6. Практикум з біологічної хімії / Д.П. Бойків, О.Л. Іванків, Л.І. Коби-лянська та ін.; за ред. О.Я. Склярова. – К.: Здоров’я, 2002. – С. 255-262.

ЗМІСТОВИЙ МОДУЛЬ 19

Дата добавления: 2015-04-30