Ортотолуидиновым методом

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЛЮКОЗЫ

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 11

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ УГЛЕВОДОВ

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 10

(ГЛЮКОЗЫ И ЛАКТОЗЫ) ИОДОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ

Ц е л ь р а б о т ы - определение содержания альдоз иодометрическим методом.

Иодометрический метод основан на окислении альдегидной группы углеводов иодом в щелочной среде. Альдозы окисляются в кислоты, например: глюкоза - в глюкуроновую кислоту, лактоза - в лактобионовую.

Кетоны в щелочном растворе не взаимодействуют с йодом, что дает возможность определить альдозы в присутствии кетоз. Иодометрический метод не обнаруживает нередуцирующие сахара.

Реактивы, оборудование, материалы:

Йод (0,1 н раствор); гидроксид натрия (0,1 н раствор); тиосульфат натрия (0,1 н раствор); крахмал (1%-й раствор); колбы мерные емкостью 100 мл; колбы конические емкостью 200 мл; растворы альдов (глюкозы, лактозы); кислота соляная (0,5 н раствор).

Порядок выполнения работы

Отбирают 10 мл исследуемого раствора глюкозы и лактозы и разбавляют водой в 10 раз, используя мерную колбу емкостью 100 мл (проба для титрования должна содержать не более 0, 1 г гексоз в 1 см).

Помещают по 10 мл разбавленного раствора альдозы в три конические колбы емкостью 20 мл. В каждую колбу приливают по 25 мл 0,1 н раствора йода и при перемешивании по 35 мл 0,1 н раствора NaOH. Закрытые колбы помещают в темное место на 20 мин.

Далее в колбы приливают по 10-15 мл 0,5 н раствора HCl.

Выделившийся йод титруют титруют 0,1 н раствором тиосульфата натрия.

Порядок титрования

Первоначально титруют до получения светло-желтого окрашивания. Далее добавляют 1 мл крахмала - наблюдается появление синей окраски. Продолжают титрование до исчезновения синей окраски. По окончании титрования проверяют полноту выделения йода, прибавляя несколько мл 0,5 н раствора HCl.

Параллельно ставят контрольный опыт, при этом вместо раствора углеводов необходимо взять 10 мл дистиллированной воды. Титрование для каждого вида альдоз следует проводить в три раза.

Расчетная формула:

Массовая доля w = (v₂ –v₁)_*m_1*p_*100,

m

где m₁ - масса углеводов, соответствующая 1 мл 0,1 н раствора J₂, г (0,009 г глюкозы, 0,018 г - лактоза); m - масса раствора, взятого для определения (10 г), r» 1 г/мл; r = 10 - фактор разведения;

v₂ - объем 0,1 н раствора Na₂S₂O₃, использованного для титрования в контрольном опыте, мл; р - объем 0,1 н раствора Na₂S₂O₃, израсходованного на титрование в рабочем опыте, мл.

Ц е л ь р а б о т ы - определить содержание глюкозы фотоколориметрическим методом.

Метод основан на том, что глюкоза при нагревании с ортотолуидином в растворе уксусной кислоты дает сине-зеленое окрашивание, интенсивность которого пропорциональна концентрации глюкозы. Содержание глюкозы определяется фотоколориметрическим методом при l = 620 нм, рабочая длина кюветы - 10 мм.

Реактивы, оборудование, материалы:

ФЭК; центрифуга; ТХУ (3%-й раствор); реактив ортотолуидиновый (0,15 г тиомочевины растворяют в 94 мл ледяной уксусной кислоты и смешивают с 6 мл перегнанного о-толуидина; хранят в темной склянке); стандартный раствор глюкозы (1 г/л; 100 мг/100 мл); растворы углеводов; бульон рыбный (конц.).

Порядок выполнения работы

В две центрифужные пробирки наливают по 0,9 мл 3%-го раствора ТХУ. В одну из пробирок вносят 0,1 мл исследуемого раствора, в другую - 0,1 мл стандартного раствора, разведенного в 5 раз. Содержимое пробирок перемешивают и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин.

Берут по 0,5 мл надосадочной жидкости из каждой пробирки, переносят в обычные сухие пробирки, добавляют по 4,5 мл ортотолуидинового реактива и помещают пробирки в кипящую водяную баню на 8 мин. Вынимают и охлаждают холодной водой до комнатной температуры.

Измеряют оптическую плотность опытной и стандартной проб на ФЭКе (светофильтр красный, l = 620 нм, рабочая длина кюветы - 1 см).

Расчетная формула:

Содержание глюкозы в опытной пробе рассчитывают по стандартному раствору глюкозы (разведенному в 5 раз):

С_оп = С_ст*Д_{оп *} 0,0555,

Д_ст

где С_оп - концентрация глюкозы в исследуемом растворе, ммоль/л;

С_ст - концентрация стандартного раствора 20 мг/100 мл; Д_оп - оптическая плотность опытного раствора; Д_ст - оптическая плотность стандартного раствора; 0,0555 – коэффициент перевода С в ммоль/л.

Дата добавления: 2015-07-13