Лабораторная работа № 15

ПОЛЯРИМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 14

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ УГЛЕВОДОВ

Приборы, реактивы, материалы: поляриметр, растворы сахаров.

Этот физический метод основан на способности сахаров вращать плоскость поляризованного луча. Данное свойство является функцией концентрации водных

растворов сахара, поэтому, измеряя угол вращения плоскости поляризации, можно определить содержание сахаров.

Определение угла вращения поляризованного луча производится при помощи оптического прибора - поляриметра. Наиболее распространены поляриметры - сахариметры, имеющие условную шкалу, по которой можно находить концентрацию сахара в процентах.

Порядок выполнения работы

Наполняют поляриметрическую трубку исследуемым раствором, закрывают ее стеклышком, проследив, чтобы под ним не остались пузырьки воздуха. Осторожно завинчивают головку (без усилий) и протирают нужные части стекол трубки. Перед тем, как вложить трубку в камеру поляриметра, смотрят в окуляр отсчета и при помощи рабочего винта совмещают нуль нониуса и нулем шкалы. При таком положении шкалы поле зрения в поляриметре должно иметь равномерную освещенность, в чем убеждаются, наблюдая в окуляр зрательной трубы.

После этого поляриметрическую трубку вкладывают в камеру поляриметра и вновь смотрят в окуляр зрительной трубы. Вследствие вращения плоскости поляризованного луча раствором сахара, половинки поля зрения будут освещены неравномерно. При помощи рабочего винта вновь устанавливают равномерное освещение поля зрения и производят отсчет по шкале, пользуясь нониусом. Для этого определяют положение нулевой точки нониуса относительно делений шкалы. Если нуль нониуса приходится между двумя делениями шкалы, то берут меньшее число, которое показывает целое число отсчета по шкале. Затем вправо от нуля нониуса находят деление, которое совпадает с каким-либо делением шкалы. Это число дает десятые части отсчета по шкале. Из 3-4 определений берут среднее. 1⁰ шкалы поляриметра-сахариметра при длине трубки в 200 мм соответствует определенному содержанию сахара в 100 мл раствора. Так, для сахарозы оно равно 0,260 г,

глюкозы - 0,328 г,

лактозы - 0,330 г,

мальтозы - 0,126 г.

Умножая показания сахариметра соответственно на эти величины, находят содержание сахара в исследуемом растворе, в % (при пользовании трубкой длиной 100 мм показания умножают на два).

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФОСФОТРИОЗ (ФОСФОГЛИЦЕРИНОВОГО АЛЬДЕГИДА И ФОСФОДИОКСИАЦЕТОНА) - ПРОМЕЖУТОЧНЫХ ПРОДУКТОВ УГЛЕВОДНОГО МЕТАБОЛИЗМА - В МЫШЕЧНОЙ ТКАНИ РЫБЫ

Ц е л ь р а б о т ы - определить содержание фосфотриоз в мышечной ткани сырья фотоколориметрическим методом.

Метод основан на том, что фосфотриозы - промежуточные продукты дихотомического углеводного распада - в отличие от других фосфорилированных метаболитов глюкозы легко подвергаются гидролизу с отщеплением неорганического фосфора в щелочной среде при комнатной температуре, содержание их определяется фотоколориметрически (l = 670 нм, рабочая длина кюветы - 1 см).

Фосфоглицеральдегид Фосфодиоксиацетон

H – C = O H – C - OH

| |

H – C – OH H – C = O

| |

H – C – OH H – C - OH

| |

H H

Реактивы, оборудование, материалы:

ФЭК; кюветы; бюретки; ткань мышечная; ТХУ (2,5%-й раствор); гидроксид натрия (2 моль/л раствор); кислота соляная (2 моль/л раствор); кислота аскорбиновая (1%-й свежеприготовленный раствор); молибдат аммония (1%-й в 0,025моль/л растворе).

Для построения калибровочного графика используется стандартный раствор KH₂PO₄ (2 ммоль/мл).

Порядок выполнения работы

В пробирку с 5 мл охлажденного 2,5%-го раствора ТХУ помещают 0,5 г рыбного фарша или измельченных мышц, экстрагируют на льду в течение 10 мин. Смесь интенсивно помешивают палочкой. Приливают 5 мл дистиллированной воды, фильтруют через бумажный фильтр.

В чистую пробирку помещают 1 мл безбелкового фильтрата и добавляют 1 мл 2 М раствора NaOH. Содержимое пробирки перемешивают, оставляют стоять 20 мин.

Далее в опытную пробирку приливают 1 мл раствора 2 М HCl, жидкость перемешивают.

В контрольную пробирку прибавляют 1 мл раствора HCl, смесь перемешивают и прибавляют 1 мл безбелкового фильтрата, содержимое пробирки перемешивают еще раз.

В опытную и контрольную пробирки приливают по 0,5 мл раствора (NH₄)₂MoO₄ и по 0,5 мл раствора аскорбиновой кислоты. Дистиллированной водой общий объем смеси в обеих пробирках доводят до 10 мл. Пробы оставляют стоять 10 мин при комнатной температуре.

Опытную пробу колориметрируют на ФЭКе в кювете с толщиной слоя 1см, с красным светофильтром, длина волны 670 нм.

Контрольную пробу колориметрируют также в кювете толщиной слоя 1 см, длина волны 670 нм.

Расчетные формулы:

Оптическая плотность пробы: опытной - Д₁,

контрольной - Д₂.

Содержание PO^3-₄ моль в пробе:

опытной - m₁,

контрольной - m₂.

Лабильный фосфор, соответствующий фосфотриозам: Dm = m₁ – m₂.

Расчет проводим по формуле: Х = (m₁ – m₂)_*200_*100,

где Х - содержание фосфотриоз в 100 г мышечной ткани рыбы; 100 - разведение пробы; 200 – пересчет на 100 г мышечной ткани рыбы.

Дата добавления: 2015-07-13