КАТЕГОРИИ: Архитектура-(3434)Астрономия-(809)Биология-(7483)Биотехнологии-(1457)Военное дело-(14632)Высокие технологии-(1363)География-(913)Геология-(1438)Государство-(451)Демография-(1065)Дом-(47672)Журналистика и СМИ-(912)Изобретательство-(14524)Иностранные языки-(4268)Информатика-(17799)Искусство-(1338)История-(13644)Компьютеры-(11121)Косметика-(55)Кулинария-(373)Культура-(8427)Лингвистика-(374)Литература-(1642)Маркетинг-(23702)Математика-(16968)Машиностроение-(1700)Медицина-(12668)Менеджмент-(24684)Механика-(15423)Науковедение-(506)Образование-(11852)Охрана труда-(3308)Педагогика-(5571)Полиграфия-(1312)Политика-(7869)Право-(5454)Приборостроение-(1369)Программирование-(2801)Производство-(97182)Промышленность-(8706)Психология-(18388)Религия-(3217)Связь-(10668)Сельское хозяйство-(299)Социология-(6455)Спорт-(42831)Строительство-(4793)Торговля-(5050)Транспорт-(2929)Туризм-(1568)Физика-(3942)Философия-(17015)Финансы-(26596)Химия-(22929)Экология-(12095)Экономика-(9961)Электроника-(8441)Электротехника-(4623)Энергетика-(12629)Юриспруденция-(1492)Ядерная техника-(1748) |
Фосфоенолпировиноградной кислоты
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 16 (ФОСФОЕНОЛПИРУВАТА) В МЫШЕЧНОЙ ТКАНИ РЫБ Ц е л ь р а б о т ы - определить содержание фосфоенолпировиноградной кислоты в мышечной ткани свежей рыбы фотоколориметрическим методом.
Фосфоенолпировиноградная кислота является одним из промежуточных продуктов гликолиза в мышечной ткани. Метод основан на том, что фосфоенолпируват в щелочной среде обнаруживается при окислении йодом с отщеплением неорганического фосфора PO3-4. Содержание PO3-4 определяется фотоколориметрическим метом, содержание фосфоенолпирувата рассчитывается в мышечной ткани рыбы: CH2 CH3 || | C – OPO3H2 + J2 + NaOH C = O + NaJ + J2 + H3PO4 | | Избыток COOH COOH
J2 + Na2S2O3 2NaJ + Na3S4O6 Тиосульфат Тетратионат натрия натрия
Реактивы, оборудование, материалы: ФЭК; кюветы с толщиной слоя 1 см; баня ледяная; цилиндры; ТХУ (2,5%-й раствор); гидроксид натрия (2 моль/л раствор); кислота соляная (2 моль/л раствор); йод (0,1 моль/л раствор); тиосульфат натрия (0,05 моль/л раствор); молибдат аммония (1%-й раствор в 0,025 моль/л растворе серной кислоты); кислота аскорбиновая (1%-й раствор); дигидроортофосфат калия (стандартный раствор, 2 ммоль/мл); мышечная ткань рыбы.
Порядок выполнения работы
В пробирку с 5 мл 2,5%-го раствора ТХУ помещают 0,5 г мышечной кашицы из рыбы, экстрагируют на льду в течение 10 мин, постоянно перемешивая смесь. Прибавляют в пробирку 5 мл дистиллированной воды, раствор фильтруют через бумажный фильтр. Последовательно прибавляют в опытную пробирку 2 мл фильтрата, 1 мл раствора NaOH, 1 мл раствора J2. Смесь перемешивают и держат при комнатной температуре 15 мин. В опытную пробирку добавляют по каплям 1-2 мл (до появления характерного для йода неисчезающего бурого окрашивания). Избыток йода оттитровывают раствором Na2S2O3 до исчезновения бурой окраски (для этого следует прибавить 0,2-0,3 мл раствора тиосульфата натрия). Общий объем доводят до 10 мл и перемешивают. В контрольную пробирку добавляют 2 мл фильтрата, 1 мл 2 М раствора HCl. Общий объем доводят водой до 10 мл, смесь перемешивают. Контрольная проба необходима для учета исходного неорганического фосфора в мышечной ткани рыбы. Из опытной и контрольной пробирок отбирают по 2 мл раствора, переносят в две другие пробирки. Добавляют в каждую по 0,5 мл раствора (NH4)2MoO4 и по 0,5 мл раствора аскорбиновой кислоты. Общий объем в каждой пробирке доводят до 10 мл и оставляют пробы на 10 мин при комнатной температуре. Опытную пробу фотоколориметрируют на ФЭК в кювете с толщиной слоя в 1 см (красный светофильтр, длина волны 670 нм). Контрольную пробу колориметрируют на ФЭКе при аналогичных условиях.
Расчетные формулы
По калибровочной кривой определяют содержание PO3-4, соответствующее контрольной пробе (m1), и содержание PO3-4, соответствующее опытной пробе (m2). Содержание фосфоенолпировиноградной кислоты в 100 г мышечной ткани определяют по формуле: Х = Dm*200*р, где Dm = m2 – m1 - содержание PO3-4, соответствующее фосфоенолпирувату в пробе; 200 - коэффициент пересчета на 100 г мышечной ткани; Р - разведение раствора.
Дата добавления: 2015-07-13; Просмотров: 568; Нарушение авторских прав?; Мы поможем в написании вашей работы! Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет |