В жире фотоколориметрическим методом

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 23

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ВИТАМИНА А

Ц е л ь р а б о т ы - количественно определить содержание витамина А в жире.

Оборудование, реактивы, материалы:

ФЭК; кюветы с рабочей длиной № СМ; баня водяная; колбы с обратным холодильником; установка для отгонки эфира; воронки делительные емкостью 250 мл; эфир; хлороформ; жир рыбий; раствор ретинола ацетата в масле 100 000 МЕ в 1 мл; кислота аскорбиновая (порошок); гидроксид калия (10%-й спиртовой раствор); гидроксид калия (4%-й водный раствор); сульфат натрия (безв.); фенолфталеин (спиртовой раствор); хлороформный раствор хлорида сурьмы (хлороформный раствор, содержащий 2% уксусного альдегида).

Приготовление хлорида сурьмы

В колбу помещают 230 г треххлористой сурьмы и растворяют в 1 л хлороформа при нагревании на теплой водяной бане. Колбу закрывают притертой пробкой и оставляют на ночь. Прозрачную часть раствора сливают в мерный цилиндр емкостью 1 л, прибавляют 2% (по объему) уксусного ангидрида, переносят в темную склянку, перемешивают и закрывают притертой пробкой. Раствор годен для анализа через сутки в течение 5-6 недель.

Порядок выполнения работы

В колбу емкостью 100 мл помещают 1,5 г жира, прибавляют 0,1 г аскорбиновой кислоты, 30 мл свежеприготовленного 10%-го спиртового раствора едкого калия и нагревают на водяной бане с обратным холодильником в течение 30 мин при температуре кипения смеси. Содержимое колбы охлаждают, количественно переносят водой (50 мл) в делительную воронку емкостью 250 мл и трижды извлекают эфиром (первый раз - 50 мл, второй и третий - по 30 мл). Объединенную эфирную вытяжку промывают первоначально 30 мл, затем 50 мл 4%-го раствора едкого кали и снова водой по 30-40 мл до исчезновения щелочной реакции промывных вод (проверка по фенолфталеину).

Промытые эфирные извлечения фильтруют через бумажный фильтр с

8 г безводного сульфата натрия в перегонную колбу. Фильтр с сульфатом натрия три раза промывают эфиром по 10 мл, который фильтруют в ту же колбу. Эфир отгоняют при температуре не выше 40 ⁰С.

Остаток растворяют в хлороформе так, чтобы в 1 мл раствора содержалось около 30 МЕ витамина А. В кювету ФЭКа с толщиной слоя № СМ переносят 0,4 мл полученного раствора, быстро приливают 4 мл хлороформного раствора хлорида сурьмы, содержащего 2% уксусного ангидрида. Измерение оптической плотности проводят через 5 с после добавления в кювету хлороформного раствора сурьмы. Определение оптической плотности проводят при длине волны 620 нм. По калибровочному графику определяют содержание витамина А в 1 мл раствора.

Построение калибровочного графика

Раствор ретинола ацетата в масле 100 000 МЕ в 1 мл разводят в хлороформе для получения раствора, содержащего 100 МЕ витамина А в 1 мл. Из данного раствора методом разведения готовят серию растворов от 5 до 50 МЕ в 1 мл (табл. 17).

Таблица 17.

Номер раствора	Содержание витамина А в 1 мл, МЕ

Из каждого раствора отбирают по 0,4 мл пробы, последовательно прибавляют по 4 мл хлороформного раствора хлорида сурьмы, фотоколориметрируют при длине волны 620 нм. Для построения калибровочного графика откладывают: по оси ординат - оптическую плотность, по оси абсцисс - содержание витамина в 1 мл раствора в МЕ.

Расчетная формула

А = с _* m/Р,

где А - содержание витамина А в 1 г жира; с - содержание витамина А в 1 мл раствора, МЕ (по графику); m - масса навески жира, г; Р - разведение, мл.

Дата добавления: 2015-07-13