Влияние липазы на гидролиз жиров (без и в присутствии

Эмульгирование жиров

Качественные реакции на желчные кислоты

Понижение поверхностного натяжения воды

Реактивы, оборудование, материалы:

Пробирки; жир; вода дистиллированная; гидроксид калия (1%-й раствор); белок яичный (1%-й раствор); карбонат натрия (1%-й раствор); желчь.

Порядок выполнения работы

В пять пробирок наливают по 2-3 мл дистиллированной воды.

В четыре пробирки добавляют по пять капель эмульгаторов: в первую - желчь, во вторую - раствор белка, в третью - раствор соды, в четвертую – раствор гидроксида калия. В пятую (контрольную) пробирку эмульгатора не добавляют.

Содержимое пробирок перемешивают встряхиванием. Во все пробирки на поверхность жидкости насыпают небольшое количество серного порошка. Делают соответствующие выводы.

Желчные кислоты обнаруживают реакцией Петтенкофера. При взаимодействии кислот с оксиметилфурфуролом, образующимся из тростникового сахара под действием концентрированной серной кислоты, проявляется красно-фиолетовое окрашивание.

Реактивы, оборудование, материалы:

Сахароза (20%-й раствор); кислота серная (конц.); желчь, предварительно разведенная в два раза; чашка Петри; палочки стеклянные.

Порядок выполнения работы

На сухую чашку Петри наносят 2 капли желчи, 2 капли 20%-го раствора сахарозы и тщательно перемешивают стеклянной палочкой.

Далее приливают 7 капель серной кислоты и снова перемешивают. Наблюдается появление красной окраски, которая при стоянии переходит в красно-фиолетовую.

Реактивы, оборудование, материалы:

Пробирки; жир; желчь; белок (1%-й раствор); гидроксид калия (1%-й раствор); сода (1%-й раствор).

В пять пробирок помещают по пять капель расплавленного жира и 5 капель дистиллированной воды. В четыре пробирки добавляют по 5 капель эмульгаторов: в первую - желчь, во вторую - раствор белка, в третью - раствор едкого калия, в четвертую - раствор соды. В пятую (контрольную) пробирку эмульгатора не добавляют. Если жир твердый, все пробирки помещают в горячую водяную баню. Взбалтывают содержимое всех пробирок. В первых четырех пробирках наблюдается образование устойчивых эмульсий в присутствии эмульгаторов. В пятой пробе имеет место расслоение неустойчивой эмульсии, так как эмульгатор отсутствует.

эмульгатора)

Ферментом, расщепляющим жиры, является липаза панкреатического сока, активаторами липазы - соли желчных кислот, белки, ионы кальция. Оптимум рН для панкреатической липазы 7-9.

Жиры распадаются ступенчато:

CH₂ – O – CO – R₁ CH₂ - OH

| |

CH – O – CO – R₂ + H₂O CH – O – CO – R₂ + | |

CH₂ – O – CO – R₃ CH₂ – O – CO – R₃

Диацилглицерид

+ R₁COOH

CH₂ – OH CH₂ - OH

| |

CH – O – CO – R₂ + H₂O CH – OH + R₂COOH

| |

CH₂ – O – CO – R₃ CH₂ – O – CO – R₃

Моноацилглицерид

При исследовании влияния липазы на гидролиз в качестве субстрата используется молоко; эмульгированные жиры молока легко гидролизуются с образованием глицерина и свободных жирных кислот, в результате чего наблюдается сдвиг рН в кислую область.

Реактивы, оборудование, материалы:

Пробирки; молоко; глицериновый экстракт поджелудочной железы, содержащий липазу; фенолфталеин (1%-й раствор); сода (10%-й раствор); термостат.

Порядок выполнения работы

В три пробирки наливают по 2-3 мл прокипяченного и охлажденного молока, добавляют в каждую по 1 капле фенолфталеина и для подщелачивания по 1-2 капле 10%-го раствора соды до слабо-розового окрашивания.

В первую пробирку приливают 1 мл препарата липазы, во вторую - 1 мл прокипяченного и охлажденного препарата, в третью - 1 мл препарата липазы + 5 капель желчи. Пробирки помещают на 30 мин в термостат при температуре 37 ⁰С. В первой пробирке с активной липазой и в третьей с липазой и эмульгатором наблюдается ослабление или исчезновение розовой окраски в результате взаимодействия образующихся при гидролизе свободных жирных кислот со щелочью:

Na₂CO₃ + H₂O NaHCO₃ + NaOH

RCOOH + NaOH RCOONa + H₂O.

Во второй пробирке розовая окраска не исчезает, так как инактивированная липаза не гидролизует жиры молока.

Дата добавления: 2015-07-13