Компоненты фосфолипидов

КАЧЕСТВЕННЫЕ РЕАКЦИИ НА СТРУКТУРНЫЕ

АНАЛИЗ ЛЕЦИТИНОВ И КЕФАЛИНОВ.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 7

СУЛЬФОФОСФОВАНИЛИНОВОГО РЕАКТИВА

ФОТОКОЛОРИМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ С ПОМОЩЬЮ

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 6

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ЛИПИДОВ

Ц е л ь р а б о т ы - определить содержание жира в биологическом материале.

Метод основан на том, что продукты распада ненасыщенных липидов образуют с сульфофосфованилиновым реактивом окрашенный комплекс при длине волны 500-560 нм.

Оборудование, материалы, реактивы:

Фотоэлектроколориметр; кюветы с толщиной слоя 1 см; кислота серная (конц.); кислота ортофосфорная (85%-й раствор); ванилин (0,6%-й раствор); жир; триолеин (стандартный раствор); хлороформ.

Приготовление раствора ванилина:

В небольшом количестве дистиллированной воды растворяют 0,6 г ванилина, нагревая на водяной бане. После охлаждения объем доводят до 100 мл.

Приготовление фосфорно-ванилиновой смеси:

К четырем частям ортофосфорной кислоты добавляют 1 часть 0,6%-го раствора ванилина. Хранят в посуде из темного стекла при комнатной температуре.

Приготовление стандартного раствора триолеина:

Взвешивают на аналитических весах 500 мг триолеина, вносят в мерную колбу на 100 мл и до метки доливают хлороформом. Тщательно перемешивают. Хранят в холодильнике в посуде из темного стекла с притертой пробкой.

Порядок выполнения работы

В пробирку вносят 1 мл жира и 5 мл концентрированной серной кислолты. Тщательно перемешивают. Пробирку помещают в кипящую водяную баню на 10 мин, охлаждают под струей водопроводной воды до комнатной температуры. В чистую пробирку вносят 0,4 мл смеси, добавляют 6 мл фосфорно-ванилиновой смеси, тщательно перемешивают и оставляют на 45 мин в темноте при комнатной

температуре. Фотоколориметрирование проводят при длине волны 500-560 нм в кювете с толщиной слоя 1 см. Для контрольной пробы берут 0,1 смл дистиллированной воды. Одновременно проводят фотоколориметрирование стандартной пробы. Для этого обрабатывают 0,1 мл стандартного раствора триолеина.

Расчетная формула: Х = Д_{оп *} 500

Д_ст

где Х - содержание непредельных липидов, мг%; Д_оп - оптическая плотность опытной пробы; Д_ст - оптическая плотность стандартной пробы;

500 - концентрация липидов в стандарте; мг%.

Ц е л и р а б о т ы:

1. Освоить методы выделения фосфолипидов.

2. Провести качественные реакции на компоненты фосфолипидов.

Оборудование, реактивы, материалы:

Микроскоп; стекла предметные и покровные; баня водяная; пробирки с обратным холодильником; спирт этиловый; ацетон; кислота серная (10%-й раствор); йод (насыщ. раствор J₂ в KJ); кислота уксусная (конц.); сульфат железа (порошок); пероксид водорода (15%-й раствор); кислота азотная (конц.); молибдат аммония (раствор в азотной кислоте); желток куриного яйца (сухой).

Порядок выполнения работы

1. Выделение лецитинов и кефалинов (холин- и этаноламифосфатидов).

В пробирку с обратным холодильником помещают 1 г высушенного на воздухе желтка куриного яйца, наливают 5 мл этилового спирта и ставят пробирку в заранее нагретую до 70…75 ⁰С водяную баню. Пробирку держат в бане 10 мин, время от времени встряхивая содержимое пробирки. Происходит экстрагирование из желтка лецитинов и кефалинов. Спиртовая вытяжка окрашивается в желтый цвет. После экстрагирования содержимое пробирки отфильтровывают.

2.Гидролиз лецитинов и качественные реакции на их компоненты.

К 1-2 мл спиртового экстракта добавляют 1-2 мл серной кислоты, кипятят 10-15 мин на водяной бане. Происходит гидролиз лецитинов с образованием холина и жирных кислот.

а) Гидролизат охлаждают и наблюдают появление маслянистых капель на поверхности жидкости - это жирные кислоты.

б) Маленькую каплю гидролизата переносят пипеткой или палочкой на предметное стекло, прибавляют большую каплю насыщенного раствора йода в йодиде калия. Накрыв ее покровным стеклом, наблюдают под микроскопом образование кристаллов холина в виде косо срезанных пластинок и призм бурого цвета (кристаллы Флоранса).

в) Оставшийся экстракт упаривают в фарфоровой чашке на водяной бане. Остаток после упаривания растворяют в нескольких каплях концентрированной уксусной кислоты, добавляют кристаллик сульфата железа (П), 1 мл раствора пероксида водорода и слабо подогревают (мокрое озоление). Далее раствор фильтруют. Фильтрат используют для качественной реакции на фосфат-анион. К одной капле фильтрата прибавляют 1 мл концентрированной азотной кислоты и 5-6 мл молибдата амония. При стоянии образуется желтый кристаллический осадок.

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ К РАЗДЕЛУ «ЛИПИДЫ»

1. Классификация липидов.

2. Биологические функции липидов.

3. Охарактеризуйте методы количественного определения жира в пищевом сырье.

4. Схема аппарата Сокслета.

5. Охарактеризуйте природные насыщенные жирные кислоты.

6. Каковы особенности жирных кислот гидробионтов?

7. Объясните биологическую ценность рыбьего жира.

8. Дайте определение кислотного числа. Какой вид порчи жиров оно характеризует?

9. Как определяется число омыления?

10. Какой показатель характеризует ненасыщенность жирных кислот?

11. Охарактеризуйте методику определения альдегидного числа.

12. Как рассчитывается эфирное число?

13. Какие жиры относятся к растительным жирам? Приведите примеры.

14. Приведите примеры животных жиров.

15. Какой метод используется для определения содержания ненасыщенности липидов?

16. Объясните схему анализа фосфолипидов.

17. Охарактеризуйте пищеварительные липолитические ферменты.

18. Какие виды порчи жиров Вы знаете?

19. Объясните механизм окисления жиров. Почему данный процесс называют аутокаталитическим?

20. Что такое осаливание жиров?

21. Объясните процесс высыхания масел.

РАЗДЕЛ П. УГЛЕВОДЫ.

Углеводы (глюциды) - это биоорганические соединения с эмпирический формулой C_n(H₂O)_m.

Углеводы составляют до 2% тканей животных и 80% тканей растений.

Дата добавления: 2015-07-13